Oznaczanie całkowitej liczby drobnoustrojów w wodzie rzecznej. Kontrola sanitarno-mikrobiologiczna wód zbiorników otwartych, jakość wody pitnej. Pobieranie próbek i przygotowanie ich do analizy

Spis treści tematu "Badania sanitarne i bakteriologiczne.": Pod kontrolą obejmuje badania i wnioski dotyczące możliwości wykorzystania zbiornika (do picia, celów domowych lub innych), wyjaśnienie przyczyn zanieczyszczenia odchodami oraz określenie zdolności zbiornika do samooczyszczania. Oznacza się TMC, izoluje się bakterie z grupy coli, Escherichia coli, enterokoki, gronkowce i mikroorganizmy chorobotwórcze (salmonella, vibrio cholerae, leptospira, shigella i enterowirusy).

Liczba tych ostatnich nie powinna przekraczać 100 za 1 litr na terenie pływalni i nie więcej niż 20 za 1 litr wody w basenach i woda morska. W ostatnie lata Opracowano i zaproponowano dodatkowe kryteria oceny stanu sanitarnego zbiorników wodnych, do których zaliczają się wskaźniki miana enterokoków i Clostridium petfringens oraz wskaźnik bakteriofagowy.

Sanitarna i mikrobiologiczna kontrola jakości wody pitnej

Sanitarne badanie mikrobiologiczne woda pitna obejmuje oznaczenie TMC, liczby enterobakterii, zarodników Clostridia redukujących siarczyny i colifagów.

Definicja TMC przy ocenie jakości wody pitnej. WMS umożliwia ocenę poziomu skażenia mikrobiologicznego wody pitnej, uzupełnienie wskaźników skażenia odchodami, a jednocześnie pozwala na identyfikację zanieczyszczeń pochodzących z innych źródeł (np. ścieków przemysłowych). Wykryty ponownie nieoczekiwany wzrost TMC (nawet w granicach normy) jest sygnałem do poszukiwania przyczyny zanieczyszczenia. Wskaźnik ten jest również niezbędny do pilnego wykrycia masowego skażenia mikrobiologicznego nieznanego charakteru w wodzie pitnej. Każdą analizowaną próbkę należy posiać na co najmniej dwóch szalkach Petera o objętości 1 ml. Po 24 godzinach zlicza się kolonie wyhodowane na obu płytkach, wyniki sumuje się i dzieli przez dwa. Wynik końcowy wyraża się liczbą jednostek tworzących kolonie (CFU) w 1 ml badanej próbki wody. Nie powinno być więcej niż 50 CFU w 1 ml wody pitnej.

Oznaczanie liczby enterobakterii. Prowadząc badania, nie ograniczają się do wykrywania bakterii z grupy coli, ale wykorzystują szersze pojęcie - bakterie z rodziny Enterobacteriaceae i termotolerancyjne bakterie z grupy coli.

Bakterie z rodziny Enterobacteriaceae obejmują Gram-ujemne, oksydazoujemne, tworzące przetrwalniki pałeczki, które rosną na pożywkach z laktozą (na przykład Endo) i fermentują glukozę do kwasu i gazu w temperaturze 37 ° C przez 24 godziny. Wykrywanie bakterii z rodziny Enterobacteriaceae w wodzie pitnej wskazuje na potencjalne zagrożenie epidemiczne związane z korzystaniem z wody. Wskaźnik „bakterie z rodziny Enterobacteriaceae*” jest głównym standaryzowanym wskaźnikiem zapewniającym najbardziej wiarygodną kontrolę obecności prawie wszystkich przedstawicieli bakterii jelitowych w wodzie.

Termotolerancyjne bakterie z grupy coli mają wszystkie cechy bakterii z rodziny Enterobacteriaceae, a ponadto fermentują laktozę z utworzeniem aldehydu, kwasu i gazu w temperaturze 44 ° C przez 24 godziny szybko tracą tolerancję termiczną, dlatego wykrywanie bakterii ta właściwość wskazuje na niedawne przedostanie się bakterii jelitowych do wody (zanieczyszczenie świeżymi odchodami).

Numeryczne wyrażenie wyniku analizy charakteryzuje stopień zanieczyszczenia wody kałem. W 300 ml wody pitnej nie powinny znajdować się bakterie z rodziny Enterobacteriacea oraz bakterie termotolerancyjne.

Wykrywanie zarodników Clostridia redukujących siarczyny. Zarodniki Clostridia redukujące siarczyny są bardziej odporne na dezynfekcję i niekorzystne czynniki środowiskowe niż inne bakterie wskaźnikowe. Ze względu na tę właściwość wskaźnik jest rekomendowany do oceny efektywności procesy technologiczne oczyszczanie wody. Wskaźnik ten ma szczególne znaczenie przy ocenie chlorowania pierwotnego, ponieważ inaktywuje prawie wszystkie bakterie wskaźnikowe. Wykrycie Clostridia w wodzie przed przedostaniem się do sieci dystrybucyjnej wskazuje na niewystarczające leczenie i prawdopodobnie w trakcie leczenia nie zostały zabite patogeny odporne na dezynfekcję. W 20 ml badanej wody pitnej nie powinny znajdować się zarodniki Clostridia redukujące siarczyny.

Oznaczanie liczby kolifagów. Najczęściej zawartość colifagów w wodzie pitnej określa się metodą miareczkową, która polega na wstępnej ich hodowli w pożywce wzbogacającej (hodowla Escherichia coli na agarze odżywczym), a następnie wykryciu łysinek kolifagów na trawniku E. coli w 100 ml badanej wody nie powinno być PFU kolifagów.

Niedopasowanie wody, a także składu chemicznego, sprawia, że ​​nie nadaje się ona do picia. Jeśli źródło zaopatrzenia w wodę nie jest chronione przed bezpośrednim wpływem środowiska lub instalacje wodociągowe są przestarzałe lub nie były czyszczone przez długi czas, konieczne jest po prostu badanie mikrobiologiczne. Od tego zależy Twoje zdrowie i bezpieczeństwo! Jest to szczególnie ważne dla tych, którzy korzystają ze studni. – gleba, ma bezpośredni kontakt z glebą, co oznacza, że ​​grozi „wypiciem” azotanów, metali ciężkich, amoniaku i oczywiście szkodliwych substancji organicznych, które dostają się do gleby w wyniku działalności gospodarstw rolnych lub ziemie.

W tabeli 1 przedstawiono wskaźniki mikrobiologiczne aktualnej normy SanPiN 2.1.4.1074-01 dla wody pitnej:

Tabela 1. Normy mikrobiologiczne dla wody pitnej

Standardowa analiza mikrobiologiczna

Standardowa analiza mikrobiologiczna wody pitnej na Moskiewskim Uniwersytecie Państwowym obejmuje oznaczenie trzech wskaźników: całkowitej liczby drobnoustrojów, całkowitej liczby bakterii z grupy coli i termotolerancyjnych bakterii z grupy coli.

Zaawansowana analiza mikrobiologiczna

Zaawansowana analiza mikrobiologiczna wody obejmuje analizę pięciu wskaźników: całkowitej liczby drobnoustrojów, całkowitej liczby bakterii z grupy coli, liczby termotolerancyjnych bakterii z grupy coli, miana kolifagów i zawartości zarodników bakterii redukujących siarczyny.

Analiza mikrobiologiczna zbiorników wód powierzchniowych (stawy, rzeki, rozlewiska)

Często na naszej posesji lub w jej pobliżu znajdują się zbiorniki wodne, w których my i nasze dzieci lubimy spędzać czas. Woda w tych zbiornikach oczywiście nie nadaje się do picia, ale jej bezpieczeństwo dla człowieka, podobnie jak wody pitnej, jest regulowane. W tabeli 2 przedstawiono wskaźniki mikrobiologiczne obowiązującej normy w zakresie wymagań higienicznych ochrony wody powierzchniowe(SanPiN 2.1.5.980-00)

Tabela 2. Normy mikrobiologiczne dotyczące korzystania z wód rekreacyjnych i na obszarach zaludnionych

Standardowa analiza mikrobiologiczna (jednolite części wód powierzchniowych)

Analiza mikrobiologiczna wody nieprzeznaczonej do picia obejmuje oznaczenie ilości dwóch wskaźników: bakterii z grupy coli ogółem i bakterii z grupy coli termotolerancyjnych.

Zaawansowana analiza mikrobiologiczna (wody powierzchniowe):

Oprócz dwóch głównych wskaźników proponujemy przeprowadzić dodatkową analizę pod kątem zawartości: colifagów, drożdżaków oportunistycznych i mikromycetów (częstych towarzyszy chorób oportunistycznych) oraz wskaźnika samooczyszczania zbiornika.

Oznaczanie bakterii z rodzaju Salmonella i rodzaju Enterococcus

W przypadku znacznego przekroczenia norm SanPiN 2.1.5.980-00 i możliwego skażenia zbiornika odchodami sugerujemy wykonanie analizy na obecność patogenów infekcje jelitowe(rodzaj Salmonella i Enterococcus).

Słowniczek

Całkowita liczebność drobnoustrojów (TMC)

Metoda oznacza w wodzie pitnej całkowita liczba mezofilne mikroorganizmy tlenowe i fakultatywnie beztlenowe (FAM), zdolne do tworzenia kolonii na agarze odżywczym w temperaturze 37°C przez 24 godziny, widoczne przy 2-krotnym powiększeniu. Wskaźnik ten identyfikuje potencjalne bakterie, które mogą szkodzić zdrowiu ludzkiemu.

Powszechne bakterie z grupy coli (TCB)

Typowe bakterie z grupy coli (TCB) to Gram-ujemne, oksydazoujemne pałeczki nie tworzące przetrwalników, zdolne do wzrostu na zróżnicowanym podłożu laktozowym, fermentujące laktozę do kwasu, aldehydu i gazu w temperaturze (37+1) °C przez ( 24-48) godzin. Wielu przedstawicieli tej grupy to mikroorganizmy należące do normalnej mikroflory żołądka, zatem nadmiar tej grupy mikroorganizmów może świadczyć o możliwym antropogenicznym (w tym kałowym) zanieczyszczeniu wody.

Termotolerancyjne bakterie z grupy coli (TCB)

Termotolerancyjne bakterie z grupy coli (TCB) należą do powszechnych bakterii z grupy coli, mają wszystkie swoje cechy, a ponadto są zdolne do fermentacji laktozy do kwasu, aldehydu i gazu w temperaturze (44 ± 0,5) ° C przez 24 godziny. Podobnie jak OKB są grupą wskaźnikową, jednak charakteryzują się większą stabilnością środowisko: Dlatego wykrycie tej grupy mikroorganizmów w wodzie może wskazywać na jej jednoznaczne skażenie odpadami pochodzenia ludzkiego.

Kolifaże

Kolifagi oznaczane metodą standardową (MUK 4.2.1018-01) są wirusami E. coli (Escherichia coli) i są uważane przez epidemiologów za dodatkową, a czasami bardziej czułą metodę określania skażenia wody przez mikroorganizmy E. coli. Cząsteczki wirusów, a w szczególności kolofagi, są bardziej odporne na środowisko niż ich bakteryjni gospodarze. Pod tym względem obecność kolifagów może służyć jako wiarygodny wskaźnik starszego zanieczyszczenia źródła wody odchodami. Wykazano bezpośrednią korelację pomiędzy zawartością kolifagów w wodzie a niebezpiecznymi dla człowieka enterowirusami, zatem obecność kolifagów w wodzie może wskazywać na wirusowe skażenie źródła. Obecny dokument regulacyjny (SanPiN 2.1.4.1074-01) zakłada brak kolifagów w 100 ml wody.

Zarodniki Clostridia redukujące siarczyny

Clostridia redukujące siarczyny to beztlenowe mikroorganizmy w kształcie pałeczek tworzące przetrwalniki, które są dodatkowym mikrobiologicznym wskaźnikiem zanieczyszczenia zbiornika odchodami. W przeciwieństwie do stosunkowo niestabilnych bakterii z grupy coli i termotolerancyjnych bakterii z grupy coli, zarodniki Clostridia mogą utrzymywać się w zbiornikach wodnych przez długi czas. Clostridia występują w jelitach ludzi i zwierząt domowych, jednak połknięte w dużych ilościach z wodą mogą spowodować zatrucie pokarmowe. Clostridia redukujące siarczyny obejmują także niebezpieczne dla człowieka Clostridium (Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani), które powodują ciężkie choroby. Według obowiązującej normy (SanPiN 2.1.4.1074-01) w 20 ml wody nie powinny znajdować się zarodniki Clostridia.

Drożdże oportunistyczne i mikromycety

Drożdże oportunistyczne i mikromycety (pleśnie) obejmują dużą heterogenną grupę organizmów grzybowych, które mogą rosnąć saprotroficznie w temperaturze 37 °C. Obejmuje przedstawicieli takich jak Candida albicans i Cryptococcus neoformans, które są częstym czynnikiem oportunistycznych chorób człowieka, powodujących kandydozę (grzybicze choroby skóry), pleśniawki itp. Inne mikromycety (Cladosporium cladosporioides, Aspergillusniger) mogą być aktywnymi czynnikami uczulającymi reakcje alergiczne, a czasami nawet same alergeny. W Federacji Rosyjskiej woda nie podlega przepisom dotyczącym obecności pleśni i drożdżaków w wodzie.

Oznaczanie wskaźnika samooczyszczania (z MUK 4.2.1884-04)

Całkowita liczba mikroorganizmów w wodzie zbiorników na terenach rekreacyjnych nie jest ujednolicona, ponieważ poziom tej grupy mikroorganizmów w dużej mierze zależy od cech przyrodniczych każdego obiektu, pory roku itp.

Jednak przy wyborze nowego źródła zaopatrzenia w wodę lub miejsca wypoczynku w wodzie zbiorników konieczne jest dodatkowo określenie całkowitej liczby drobnoustrojów, która zwiększa:

• w temperaturze 37 °C przez 24 godziny;
• w temperaturze 22°C przez 72 godziny.

Uważa się, że:

1. TMC w temperaturze 37°C reprezentowana jest głównie przez mikroflorę alochtoniczną (wprowadzoną do zbiornika w wyniku zanieczyszczeń antropogenicznych, w tym odchodów);
2. TMC w temperaturze 20-22°C reprezentowana jest, oprócz alochtonicznej, przez mikroflorę rodzimą (naturalną, charakterystyczną dla danego zbiornika).

Stosunek liczebności tych grup mikroorganizmów pozwala ocenić intensywność procesu samooczyszczania. Na koniec procesu samooczyszczania współczynnik TMC wynosi 22°C / TMC wynosi 37°C. W miejscach skażenia odpadami komunalnymi ścieki wartości liczbowe obu grup są zbliżone.

Wskaźnik pozwala uzyskać dodatkowe informacje o stanie sanitarnym zbiorników wodnych, źródłach zanieczyszczeń, procesach samooczyszczania.

Wodę z kranu zaszczepia się w objętości 1 cm3 (1 ml). Próbkę umieszcza się na sterylnej szalce Petriego, wlewa do 10-12 ml roztopionego i schłodzonego do temperatury 45°C agaru odżywczego i miesza z wodą. Zaszczepienie inkubuje się w temperaturze 37°C przez 1-2 dni. Następnie zlicza się i oblicza liczbę kolonii wyhodowanych na powierzchni i w głębi podłoża liczba mikrobiologiczna wody- liczba mikroorganizmów w 1 ml.

Metoda miareczkowania
Aby zbadać wodę wodociągową, zaszczepić trzy objętości po 100 ml, trzy objętości po 10 ml i trzy objętości po 1 ml w podłożu glukozowo-peptonowym. Uprawy inkubuje się przez 24 godziny w temperaturze 37°C. Fermentację ocenia się na podstawie obecności pęcherzyków gazu w pływaku. Sfermentowane lub mętne próbki zaszczepia się na pożywce Endo.
Z wyhodowanych kolonii pobiera się rozmazy, barwi je metodą Grama i wykonuje się test oksydazowy, który pozwala na różnicowanie bakterii z rodzaju Escherichia, Citrobacter I Enterobakter od bakterii Gram-ujemnych z rodziny Pseudomonadowate i inne bakterie oksydazododatnie żyjące w wodzie.
Miano Coli wodę mierzy się minimalną ilością wody (ml), w której wykryto bakterie z grupy coli, indeks coli - ilość bakterii z grupy coli zawarta w 1 litrze badanej wody.

Oznaczanie liczby mikrobiologicznej powietrza

Ilościowe metody mikrobiologiczne badania powietrza opierają się na zasadach osadzania (sedymentacji), aspiracji lub filtracji.
Metoda sedymentacyjna. Dwie płytki Petriego z agarem odżywczym pozostawia się otwarte na 60 minut, po czym plony inkubuje się w termostacie w temperaturze 37°C. Wyniki ocenia się na podstawie całkowitej liczby kolonii wyhodowanych na obu szalkach: jeśli jest ich mniej niż 250, powietrze uważa się za czyste; 250-500 rodzin – średnio skażone, przy ponad 500 rodzinach – skażone.
Metoda aspiracji- dokładniejsza metoda ilościowa oznaczania liczby mikrobiologicznej powietrza. Siew powietrzny przeprowadza się za pomocą przyrządów (urządzenia Krotowa i próbnika PAB-1).
Aparat Krotowa jest zaprojektowany w taki sposób, że powietrze z zadaną prędkością przedostaje się przez wąską szczelinę płytki z pleksiglasu przykrywającej szalkę Petriego z agarem odżywczym. W tym przypadku cząsteczki aerozolu wraz z zawartymi na nich mikroorganizmami są równomiernie utrwalone na całej powierzchni ośrodka dzięki ciągłemu obrotowi czaszy pod szczeliną wejściową.
Po inkubacji uprawy w termostacie obliczana jest liczba drobnoustrojów

Metody sterylizacji

• Termiczne: para i powietrze (suche ciepło)
• Chemiczne: gazy lub roztwory chemiczne (środki sterylizujące)
• Plazma (plazma nadtlenku wodoru)
• Sterylizacja radiacyjna – stosowana w wersji przemysłowej
• Metoda filtra membranowego - stosowana w celu uzyskania małych ilości sterylnych roztworów, których jakość może gwałtownie pogorszyć się pod wpływem innych metod sterylizacji (bakteriofagi, selektywne pożywki, antybiotyki)

Metody sterylizacji termicznej

Zalety metod sterylizacji termicznej:

• Niezawodność
• Nie ma potrzeby usuwania środków sterylizujących z materiałów medycznych
• Wygoda personelu
• Sterylizacja odbywa się w opakowaniach, co pozwala zachować sterylność przez określony czas.

Sterylizacja parowa

Odbywa się to poprzez dostarczanie nasyconej pary wodnej pod ciśnieniem w sterylizatorach parowych (autoklawach).

Za najbardziej uważa się sterylizację parową skuteczna metoda, ponieważ im wyższe ciśnienie, tym wyższa temperatura pary sterylizującej materiał; Właściwości bakteriobójcze pary są wyższe niż powietrza, dlatego do sterylizacji wykorzystuje się parę przesyconą.

Sterylizacji parowej poddawane są wyroby wykonane z tekstyliów (len, wata, bandaże, materiał do szycia), gumy, szkła, niektórych materiałów polimerowych, pożywek i leków.

Powiązane informacje:

1. Analiza zależności pomiędzy zmiennymi technologicznymi, określenie podstawowych wymagań dotyczących zarządzania procesami, sformułowanie kryteriów jakości i celów zarządzania
2. Analiza dynamiki liczby pożarów w latach 2010-2014. i prognozę liczby pożarów na 2015 rok
3. Analiza liczby pożarów na terenie obsługiwanym przez 3 ROND w latach 2010-2014
4. Angina: 1) definicja, etiologia i patogeneza 2) klasyfikacja 3) anatomia patologiczna i diagnostyka różnicowa różnych postaci 4) powikłania miejscowe 5) powikłania ogólne

STYLAB oferuje chusteczki testowe, podłoża testowe i stemple mikrobiologiczne do oznaczania TMC i QMAFAnM w różnych próbkach.

Całkowita liczba drobnoustrojów (TMC) jest wskaźnikiem służącym do oceny całkowitego obciążenia bakteryjnego. Jest to jeden z głównych wskaźników określanych podczas sanitarnych badań mikrobiologicznych. Jest to całkowita ilość wszystkiego zawartego w 1 ml lub 1 cm 3 próbki. Jego wartość wyraża się w jednostkach tworzących kolonie: CFU/ml lub CFU/cm3. Jednostka tworząca kolonię to mikroorganizm, który tworzy kolonię podczas rozmnażania.

Uważa się, że im wyższy TMC, tym większe prawdopodobieństwo obecności patogenów w badanym obiekcie. Tak naprawdę na wartość tego wskaźnika wpływają także saprotrofy, które zapobiegają rozwojowi mikroorganizmów chorobotwórczych, a TMC wyraźnie koreluje jedynie ze stopniem zanieczyszczenia obiektu substancjami organicznymi. Jest to jednak ważny wskaźnik sanitarny, ponieważ pozwala ocenić czystość i jakość dezynfekcji wody, powierzchni, sprzętu i innych obiektów środowiskowych.

W produktach spożywczych zwykle oznacza się obecność mezofilnych organizmów tlenowych i fakultatywnie beztlenowych (CAFAnM). Mikroorganizmy tlenowe to żywe stworzenia, które do istnienia potrzebują tlenu. Fakultatywne tlenowce mogą żyć i rozmnażać się zarówno w obecności tlenu, jak i bez niego. Czasami termin QMAFAnM jest używany jako synonim OMC. Jego wartość wyrażana jest w CFU/g lub CFU/cm3. KMAFAnM umożliwia ocenę warunków przechowywania i transportu produkty spożywcze. GMC i QMAFAnM nie mają zastosowania do oceny produktów posiadających własną mikroflorę, np. produktów na bazie kwasu mlekowego, piwa, kwasu chlebowego itp.

Aby oznaczyć TMC i QMAFAnM, na pożywkę zaszczepia się próbkę o stężeniu początkowym i kilku jej kolejnych dziesięciokrotnych rozcieńczeniach w sterylnej wodzie lub roztworze. Jest to konieczne w przypadku, gdy w pierwotnej próbce znajduje się duża ilość mikroorganizmów, a rozróżnienie utworzonych przez nie kolonii będzie niemożliwe. Aby określić QMAFanM, zalecamy użycie chusteczek testowych. TMC można oznaczać także na twardych powierzchniach metodą nadruku stemplami mikrobiologicznymi.

Określając TMC, można również ocenić skuteczność środków dezynfekcyjnych. W tym celu konieczne jest zastosowanie podłoża z substancjami neutralizującymi ich działanie, gdyż gdy ich skuteczność maleje, środki dezynfekcyjne nie niszczą mikroorganizmów, a jedynie hamują ich rozwój. Na zwykłych podłożach takie organizmy nie mają czasu na tworzenie kolonii. Do takiej oceny służą pieczątki mikrobiologiczne.

W Federacja Rosyjska a krajami Unii Celnej parametry GMC i QMAFAnM nie powinny przekraczać parametrów ustalonych przez CU TR „O bezpieczeństwie produktów spożywczych” i innych przepisów technicznych Unii Celnej. Aktualne informacje legislacyjne można znaleźć na stronie internetowej

Mleko surowe to mleko, które nie zostało poddane obróbce cieplnej w temperaturze wyższej niż 40°С ani obróbce, w wyniku której uległy zmianie jego części składowe.

Surowe mleko może zawierać niebezpieczne mikroorganizmy, które mogą powodować choroby zakaźne i zatrucie pokarmowe. Surowe mleko zajmuje pierwsze miejsce wśród produktów spożywczych, których spożycie wiąże się z ryzykiem poważnych chorób.

Rodzaj mleka zależy od zawartości MAFAnM w 1 ml mleka, zgodnie z przepisami sanitarnymi (SanPiN 2.3.2.1078-01), mleko surowe dzieli się na:

• w przypadku mleka surowego klasy premium - nie więcej niż 300 tysięcy bakterii na 1 ml;
• dla mleka surowego I stopnia - nie więcej niż 500 tysięcy bakterii na 1 ml;
• dla mleka surowego, klasa II - nie więcej niż 4 miliony bakterii na 1 ml.

Cel pracy: zbadanie poziomu mikroorganizmów w mleku surowym. W związku z tym postawiono zadanie: określić poziom całkowitej liczby drobnoustrojów w mleku, czyli KMAFAnM (liczba mikroorganizmów mezofilnych tlenowych i fakultatywnie beztlenowych).

Materiał do badań stanowiło surowe mleko pochodzące od krowy rasy simentalskiej o imieniu „Snezhinka”, znajdującej się w szpitalu Baszkirskiego Państwowego Uniwersytetu Rolniczego.

Rysunek1 . Próbka badanego mleka.

Oznaczenie QMAFAnM przeprowadzono zgodnie z aktualnym GOST R 53430-2009. Metoda opiera się na zdolności mikroorganizmów mezofilnych tlenowych i fakultatywnie beztlenowych do namnażania się na pożywce (MPA) w temperaturze 30±1°C przez 72 godziny.

Kolejne dziesięciokrotne rozcieńczenia przygotowywałam z surowego mleka, tj. Do probówki z 9 ml sterylnej wody dodano 1 ml surowego mleka, aby uzyskać pierwsze rozcieńczenie 1:10 (10‾¹). Z pierwszego rozcieńczenia 1 ml przeniesiono do drugiej probówki zawierającej 9 ml sterylnej wody - drugie rozcieńczenie wynosiło 1:100 (10‾²) i tak dalej, aż do rozcieńczenia 10 -5.

Izolację QMAFAnM z próbek mleka surowego przeprowadzono poprzez zaszczepienie trzech ostatnich rozcieńczeń (10 -3, 10 -4, 10 -5) (Tabela 1).

Tabela1 .

Schemat upraw na pożywkach

1 ml każdego rozcieńczenia dodano do jednej szalki Petriego z uprzednio oznakowaną pokrywką i wylano na nią 14 ± 1 ml stopionego agaru schłodzonego do temperatury 40-45°C. Natychmiast po wylaniu agaru zawartość szalki Petriego dokładnie wymieszano poprzez delikatne wytrząsanie obrotowe, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie inokulum. Po zestaleniu agaru płytki Petriego odwrócono do góry dnem i umieszczono w termostacie w temperaturze 30±1°C na 72 godziny.

W każdym kubku liczono liczbę wyhodowanych kolonii i mnożono przez moc (wzór 1).

Wzór obliczeniowy: X= n*10 m

gdzie n jest liczbą kolonii zliczonych na szalce Petriego;

m to liczba dziesięciokrotnych rozcieńczeń.

Otrzymałem następującą wartość średnią (tabela 2).

Tabela 2.

Liczba wyhodowanych kolonii

Z Tabeli 2 widać, że na szalce Petriego o rozcieńczeniu 10‾ 3 wyrosło 21 kolonii, co odpowiada 21 000 mikroorganizmów; w naczyniu z rozcieńczeniem 10‾ 4 – 13 kolonii (130 000), a w naczyniu z rozcieńczeniem 10‾ 5 – 6 kolonii (600 000). Średnia wartość trzech wskaźników wyniosła 250333 (250,333 tys.) mikroorganizmów.

Zatem całkowita liczba drobnoustrojów w mleku, czyli liczba mikroorganizmów mezofilnych tlenowych i fakultatywnie beztlenowych w badanym mleku wynosi 250,333 tys. Zgodnie z przepisami sanitarnymi (SanPin 2.3.2.1078-01) mleko to można zaliczyć do kategorii surowych. „najwyższej klasy”, ponieważ QMAFAnM zawierał niecałe 300 tysięcy bakterii w 1 ml.

Należy również zaznaczyć, że mleko to surowe jest zgodne z GOST R 53430-2009, nadaje się do bezpośredniego spożycia, przetwarzania na przetwory mleczne, spełnia wymagania sanitarne dotyczące utrzymania zwierząt i higieny produkcji mleka.

Referencje:

1. Gosmanov R.G. Mikrobiologia sanitarna: Seminarium. – St.Petersburg: Wydawnictwo „Lan”, 2010. – 240 s.
2. Ilyasova Z.Z. Wytyczne dla zajęć praktycznych S2.B.11 Mikrobiologia i mykologia weterynaryjna: Instrukcje metodyczne / Z. Z. Ilyasova. – Ufa: Baszkirski Państwowy Uniwersytet Rolniczy, 2015. – 28 s.
3. Mleko i produkty przetwórstwa mleka. Metody analizy mikrobiologicznej: GOST R 53430-2009. – Zatwierdzone i wprowadzone w życie rozporządzeniem Federalnej Agencji ds. Regulacji Technicznych i Metrologii z dnia 27 listopada 2009 r. nr 520-st. – M.: Standartinform, 2010.