Определение общего микробного числа речной воды. Санитарно-микробиологический контроль над водами открытых водоёмов, качества питьевой воды. Отбор проб и подготовка их к анализу

В контроль над поверхностными водоёмами входят исследование и заключение о возможности использовать водоём (для питьевых, хозяйственных или других нужд), выяснение причин фекального загрязнения, определение способности водоёма к самоочищению. Проводят определение ОМЧ, выделяют БГКП, кишечную палочку, энтерококки, стафилококки и патогенные микроорганизмы (сальмонеллы, холерные вибрионы, лептоспиры, шигеллы и энтеровирусы).

Количество последних не должно превышать 100 в 1 л в зоне купания и не более 20 в 1 л воды бассейнов и морской воды. В последние годы разработаны и предложены дополнительные критерии оценки санитарного состояния водоёмов, в которые включены показатели титра энтерококков и Clostridium petfringens, а также индекс бактериофагов.

Санитарно-микробиологический контроль качества питьевой воды

Санитарно-микробиологическое исследование питьевой воды включает определение ОМЧ, количества энтеробактерий, спор сульфитредуцирующих клостридии и колифагов.

Определение ОМЧ при оценке качества питьевой воды. ОМЧ позволяет оценить уровень микробного загрязнения питьевой воды, дополняя показатели фекального загрязнения, и одновременно позволяет выявить загрязнение из других источников (например, промышленные сбросы). Неожиданное увеличение ОМЧ (даже в пределах норматива), выявленное повторно, служит сигналом для поиска причины загрязнения. Также этот показатель незаменим для срочного обнаружения в питьевой воде массивного микробного загрязнения неизвестной природы. Из каждой анализируемой пробы должен быть сделан посев не менее чем на две чашки Пётр и объёмом 1 мл. Через 24 ч проводят подсчёт выросших колоний на обеих чашках, результаты суммируют и делят на два. Окончательный результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой пробы воды. В 1 мл питьевой воды должно быть не более 50 КОЕ.

Определение количества энтеробактерий . При проведении исследований не ограничиваются обнаружением БГКП, но используют более широкое понятие - бактерии семейства Enterobacteriaceae и термотолерантные колиформные бактерии.

Бактерии семейства Enterobacteriaceae включают грамотрицательные, оксидаза-отрицатель-ные, споронеобразующие палочки, растущие на средах с лактозой (например, Эндо) и ферментирующие глюкозу до кислоты и газа при температуре 37 °С в течение 24 ч. Обнаружение в питьевой воде бактерий семейства Enterobacteriaceae указывает на потенциальную эпидемическую опасность водопользования. Показатель «бактерии семейства Enterobacteriaceae* - основной нормируемый показатель, обеспечивающий наиболее надёжный контроль присутствия в воде практически всех представителей кишечных бактерий.

Термотолерантные колиформные бактерии обладают всеми признаками бактерий семейства Enterobacteriaceae, и, кроме того, ферментируют лактозу с образованием альдегида, кислоты и газа при температуре 44 °С в течение 24 ч. Термотолерантность быстро утрачивается, поэтому обнаружение бактерий с таким свойством свидетельствует о недавнем попадании в воду кишечных бактерий (свежее фекальное загрязнение).

Численное выражение результата анализа характеризует степень фекального загрязнения воды . Бактерии семейства Enterobacteriacea и термотолерантные бактерии должны отсутствовать в 300 мя питьевой воды.

Выявление спор сульфитредуцирующих клостридий . Споры сульфитредуцирующих клостридий более устойчивы к обеззараживанию и действию неблагоприятных факторов окружающей среды, чем другие индикаторные бактерии. На основании этого свойства показатель рекомендован для оценки эффективности технологических процессов очистки воды. Особое значение этот показатель имеет при оценке первичного хлорирования, так как оно инактивиру-ет практически все индикаторные бактерии. Обнаружение клостридий в воде перед поступлением в распределительную сеть указывает на недостаточную очистку и на то, что устойчивые к обеззараживанию патогенные микроорганизмы, вероятно, не погибли при очистке. Споры сульфитредуцирующих клостридий должны отсутствовать в 20мл исследуемой питьевой воды.

Определение количества колифагов . Наиболее часто содержание колифагов в питьевой воде определяют титрационным методом, включающим предварительное подращивании их в среде обогащения (культура Escherichia coli на питательном агаре) с последующим выявлением бляшек колифага на газоне Е. coli В 100 мл исследуемой воды должны отсутствовать БОЕ колифагов.

Несоответствие воды , так же как и химическим, делает ее непригодной для питья. Если Ваш источник водоснабжения не защищен от прямого воздействия окружающей среды или коммунальные системы устарели или давно не чистились, то сделать микробиологический просто необходимо. От этого зависит Ваше здоровье и безопасность! Особенно это важно для тех, кто пользуется колодцем. – грунтовая, она на прямую контактирует с почвами, а значит, грозит «напоить» Вас и нитратами, и тяжелыми металлами, и аммиаком, и, конечно, вредными органическими веществами, которые попадают в почву в результате деятельности сельскохозяйственных ферм или угодий.

В таблице 1 представлены микробиологические показатели действующего норматива СанПиН 2.1.4.1074-01 для питьевой воды:

Таблица 1. Микробиологические нормативы для питьевой воды

Стандартный микробиологический анализ

Стандартный микробиологический анализ питьевой воды в МГУ включает определение трех показателей: общего микробного числа, количества общих колиформных и термотолерантных колиформных бактерий.

Расширенный микробиологический анализ

Расширенный микробиологический анализ воды включает анализ пяти показателей: общего микробного числа, количества общих колиформных бактерий, количества термотолерантных колиформных бактерий, титр колифагов и содержание спор сульфитредуцирующих бактерий.

Микробиологический анализ поверхностных водоёмов (пруды, реки, бассейны)

Часто на наших участках или поблизости имеются водоемы, где мы и наши дети с удовольствием любим провести время. Конечно, вода в данных водоемах не является питьевой, но ее безопасность для человека также, как и питьевая, регламентируется. В таблице 2 представлены микробиологические показатели действующего норматива по гигиеническим требованиям к охране поверхностных вод (СанПиН 2.1.5.980-00)

Таблица 2. Микробиологические нормативы для рекреационного водопользования, а также в черте населенных мест

Стандартный микробиологический анализ (поверхностные водоёмы)

Микробиологический анализ воды, предназначенной не для питья, включает определение количества двух показателей: общих колиформных и колиформных термотолерантных бактерий.

Расширенный микробиологический анализ (поверхностные водоёмы):

Помимо двух основных показателей мы предлагаем провести дополнительный анализ на содержание: колифагов, условно-патогенных дрожжей и микромицетов (частых спутников опортунистических заболеваний) и индекса самоочищения водоёма.

Определение бактерий рода Salmonella и рода Enterococcus

При значительном превышении нормативов СанПиН 2.1.5.980-00, а также возможном фекальном загрязнении водоёма, мы предлагаем провести анализ на наличие возбудителей кишечных инфекций (род Salmonella и Enterococcus).

Глоссарий

Общая микробная численность (ОМЧ)

Метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37 °С в течение 24 часов, видимые с увеличением в 2 раза. Данный индикатор выявляет потенциальных бактерий, способных причинить вред здоровью человека.

Общие колиформные бактерии (ОКБ)

Общие колиформные бактерии (ОКБ) - грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (37+1) °С в течение (24-48) часов. Многие представители данной группы являются микроорганизмами нормальной микрофлоры желудка, поэтому превышение данной группы микроорганизмов может говорить о возможно антропогенном (в том числе и фекальном) загрязнении воды.

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ)

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число общих колиформных бактерий, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (44±0,5) °С в течение 24 часов. Также, как и ОКБ являются индикаторной группой, однако более устойчивые в окружающей среде: вот почему обнаружение данной группы микроорганизмов в воде может говорить об однозначном загрязнении ее продуктами жизнедеятельности человека.

Колифаги

Колифаги, определяемые стандартным методом (МУК 4.2.1018-01), являются вирусами кишечной палочки (Escherichia coli) и рассматриваются эпидемиологами как дополнительный, а порой и более чувствительный, метод в определении загрязнения воды микроорганизмами группы кишечной палочки. Вирусные частицы, и в частности колифаги, более устойчивы к окружающей среде, чем их бактерии-хозяева. В связи с этим, наличие колифагов может служить достоверной меткой о более давнем фекальном загрязнении источника воды. Показана прямая корреляция между содержанием колифагов в воде и опасных для человека энтеровирусов, поэтому наличие колифагов в воде может говорить о вирусном заражении источника. Действующий нормативный документ (СанПиН 2.1.4.1074-01) подразумевает отсутствие колифагов в 100 мл воды.

Споры сульфитредуцирующие клостридии

Сульфитредуцирующие клостридии – спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, являющиеся дополнительным микробиологическим показателем фекального загрязнения водоема. В отличие от относительно неустойчивых колиформных и термотолерантных колиформных бактерий, споры клостридий могут сохраняться в водоемах долгое время. Клостридии встречаются в кишечнике человека и домашних животных, однако, при попадании с водой в большом количестве могут вызвать пищевые отравления. К сульфитредуцирующим клостридиям относятся в том числе и опасные для человека клостридии (Clostridiumbotulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani), вызывающие тяжелейшие заболевания. Согласно действующему нормативу (СанПиН 2.1.4.1074-01) споры клостридий должны отсутствовать в 20 мл воды.

Условно-патогенные дрожжи и микромицеты

К условно-патогенным дрожжам и микромицетам (плесени) относят большую неоднородную группу грибных организмов, способных сапротрофно расти при 37 °С. В нее входят такие представители, как Candida albicans и Cryptococcus neoformans, которые являются частым фактором оппортунистических заболеваний человека, вызывая кандидозы (грибковые заболевания кожи), молочницы и проч. Другие организмы микромицеты (Cladosporium cladosporioides, Aspergillusniger) могут являться активными сенсебилизаторами аллергических реакций, а иногда и самими аллергенами. В РФ не нормируется вода по плесеням и дрожжевым организмам в воде.

Определение индекса самоочищения (из МУК 4.2.1884-04)

Общее число микроорганизмов не нормируется в воде водоемов в зонах рекреаций, поскольку уровень этой группы микроорганизмов в большей мере зависит от природных особенностей каждого объекта, времени года и т.п.

Однако при выборе нового источника водоснабжения или места рекреации в воде водоёмов дополнительно следует определять общую микробную численность, вырастающую:

• при температуре 37 °С в течение 24 часов;
• при температуре 22 °С в течение 72 часов.

Полагается, что:

1. ОМЧ при 37 °С представлена большей частью алохтонной микрофлорой (внесенную в водоем в результате антропогенного загрязнения, в том числе фекального);
2. ОМЧ при 20-22 °С представлена, помимо алохтонной, аборигенной микрофлорой (естественной, свойственной для данного водоёма).

Соотношение численности этих групп микроорганизмов позволяет судить об интенсивности процесса самоочищения. При завершении процесса самоочищения коэффициент ОМЧ 22 °С/ ОМЧ 37 °С. В местах загрязнения хозяйственно-бытовыми сточными водами численные значения обеих групп близки.

Показатель позволяет получить дополнительную информацию о санитарном состоянии водоемов, источниках загрязнения, процессах самоочищения.

Водопроводную воду засевают в объеме 1см3 (1 мл). Пробу вносят в стерильную чашку Петри, заливают 10-12 мл расплавленного и остуженного до 45°С питательного агара, перемешивают с водой. Посев инкубируют при 37°С в течение 1-2 сут. Затем подсчитывают количество выросших на поверхности и в глубине среды колоний и вычисляют микробное число воды - количество микроорганизмов в 1 мл.

Титрационный метод
Для исследования водопроводной воды делают посевы трех объемов по 100 мл, трех объемов по 10 мл и трех объемов по 1 мл в глюкозопептонную среду. Посевы инкубируют в течение суток при 37°С. О брожении судят по наличию пузырьков газа в поплавке. Из забродивших или помутневших проб производят посевы на среду Эндо.
Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia, Citrobacter иEnterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде.
Коли-титр воды измеряется минимальным количеством воды (мл), в котором обнаруживаются БГКП, коли-индекс - количеством БГКП, содержащихся в 1 л исследуемой воды.

Определение микробного числа воздуха

Количественные микробиологические методы исследования воздуха основаны на принципах осаждения (седиментации), аспирации или фильтрации.
Седиминтационный метод. Две чашки Петри с питательным агаром оставляют открытыми в течение 60 мин, после чего посевы инкубируют в термостате при 37°С. Результаты оценивают по суммарному числу колоний, выросших на обеих чашках: при наличии менее 250 колоний воздух считается чистым; 250-500 колоний - загрязненным в средней степени, при количестве колоний более 500 - загрязненным.
Аспирационный метод - более точный количественный метод определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью приборов (прибор Кротова и пробоотборник ПАБ-1).
Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просачивается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной щелью.
После инкубации посева в термостате проводят расчет микробного числа

Методы стерилизации

• Термическая: паровая и воздушная (сухожаровая)
• Химическая: газовая или химическими растворами (стерилянтами)
• Плазменная (плазмой перекиси водорода)
• Радиационная стерилизация - применяется в промышленном варианте
• Метод мембранных фильтров - применяется для получения небольшого количества стерильных растворов, качество которых может резко ухудшиться при действии других методов стерилизации(бактериофаг, селективные питательные среды, антибиотики)

Термические методы стерилизации

Преимущества термических методов стерилизации:

• Надёжность
• Отсутствие необходимости удаления стерилянтов с предметов медицинского назначения
• Удобство работы персонала
• Стерилизация проводится в упаковках, что позволяет сохранить стерильность некоторый период времени.

Паровая стерилизация

Осуществляется подачей насыщенного водяного парапод давлением в паровых стерилизаторах (автоклавах).

Паровая стерилизация под давлением считается наиболее эффективным методом, так как чем выше давление, тем выше температура пара, стерилизующего материал; бактерицидные свойства пара выше, чем воздуха, поэтому для стерилизации применяют пересыщенный пар.

Паровой стерилизации подвергают изделия из текстиля (бельё, вату, бинты, шовный материал), из резины, стекла, некоторых полимерных материалов, питательные среды, лекарственные препараты.

Похожая информация:

1. Анализ взаимосвязи между технологическими переменными, определение основных требований к ведению процессов, формулирование критериев качества и целей управления
2. Анализ динамики числа пожаров за 2010-2014 гг. и прогноз количества пожаров на 2015 г
3. Анализ числа пожаров в районе, обслуживаемом 3 РОНД за период с 2010-2014 гг
4. Ангины: 1) определение, этиология и патогенез 2) классификация 3) патологическая анатомия и дифференциальная диагностика различных форм 4) местные осложнения 5) общие осложнения

СТАЙЛАБ предлагает тест-салфетки, тест-подложки и микробиологические штампы для определения ОМЧ и КМАФАнМ в различных пробах.

Общее микробное число (ОМЧ) является показателем для оценки общей бактериальной обсемененности. Это один из основных показателей, определяемых в ходе санитарно-микробиологических исследований. Это общее количество всех , находящихся в 1 мл или 1 см 3 пробы. Его значение выражают в колониеобразующих единицах: КОЕ/мл или КОЕ/см 3 . Колониеобразующая единица - это микроорганизм, образующий колонию в ходе размножения.

Считается, что чем выше ОМЧ, тем вероятнее присутствие в исследуемом объекте патогенов. В действительности на величину этого показателя влияют также сапротрофы, которые препятствуют развитию патогенных микроорганизмов, и ОМЧ однозначно соотносится лишь со степенью загрязненности объекта органическими веществами. Однако это важный санитарный показатель, поскольку он позволяет оценить чистоту и качество дезинфекции воды, поверхностей, оборудования и других объектов окружающей среды.

В пищевых продуктах обычно определяют количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных организмов (КМАФАнМ). Аэробные микроорганизмы - это живые существа, которым для существования необходим кислород. Факультативные аэробы могут жить и размножаться как в присутствии кислорода, так и без него. Иногда термин КМАФАнМ используют в качестве синонима ОМЧ. Его значение выражают в КОЕ/г или КОЕ/см 3 . КМАФАнМ позволяет оценить условия хранения и транспортировки пищевых продуктов. ОМЧ и КМАФАнМ неприменимы для оценки продуктов, обладающих собственной микрофлорой, к примеру, молочнокислых продуктов, пива, кваса и др.

Для определения ОМЧ и КМАФАнМ на среду высевают пробу исходной концентрации и несколько ее последовательных десятикратных разведений в стерильной воде или растворе. Это необходимо на случай, если в исходной пробе очень много микроорганизмов, и различить колонии, образованные ими, будет невозможно. Для определения КМАФанМ рекомендуем использовать тест-салфетки . Определить ОМЧ на твердых поверхностях можно также методом отпечатка с помощью микробиологических штампов.

С помощью определения ОМЧ можно также оценивать эффективность дезинфектантов. Для этого необходимо использовать среду с веществами, нейтрализующими их действие, поскольку при снижении эффективности дезинфектанты не уничтожают микроорганизмы, а лишь угнетают их рост. На обычных средах такие организмы не успевают образовать колонии. Для такой оценки предназначены микробиологические штампы .

В Российской Федерации и странах Таможенного Союза параметры ОМЧ и КМАФАнМ не должны превышать установленных ТР ТС «О безопасности пищевой продукции» и другими техническими регламентами Таможенного Союза. С актуальной законодательной информацией можно ознакомиться на сайте

Сырое молоко - молоко, не подвергавшееся термической обработке при температуре более чем 40ºС или обработке, в результате которой изменяются его составные части.

Сырое молоко может содержать опасные микроорганизмы, которые могут вызывать инфекционные болезни и пищевые отравления. Сырое молоко занимает первое место среди продуктов, употребление которых связано с риском получить серьезное заболевание.

Сорт молока зависит от количеств МАФАнМ в 1 мл молока, по санитарным правилам и нормам (СанПиН 2.3.2.1078-01) сырое молоко подразделяют на:

• на молоко сырое, высший сорт - не более 300 тыс. бактерий в 1 мл;
• на молоко сырое, I сорт - не более 500 тыс. бактерий в 1 мл;
• на молоко сырое, II сорт - не более 4 млн бактерий в 1 мл.

Цель исследования: изучить уровень микроорганизмов в сыром молоке. В связи с этим, была поставлена задача: определить уровень общего микробного числа в молоке, а именно КМАФАнМ (количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов).

Материалом для исследования служило сырое молоко, взятое от коровы по кличке «Снежинка», симментальской породы находящейся в стационаре БашГАУ.

Рисунок 1 . Образец исследуемого молока.

Определение КМАФАнМ проводила согласно действующего ГОСТ Р 53430-2009. Метод основан на способности мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов размножаться на питательной среде (МПА) при температуре 30±1°С в течение 72 ч.

Из сырого молока готовила последовательные десятикратные разведения, т.е. 1 мл сырого молока вносила в пробирку с 9 мл стерильной воды для получения первого разведения 1:10 (10‾¹). Из первого разведения 1 мл перенесла во вторую пробирку с 9 мл стерильной воды – получилось второе разведение 1:100 (10‾²) и так далее до разведения 10 -5 .

Выделение КМАФАнМ из проб сырого молока проводила путем посева трех последних разведений (10 -3 , 10 -4 , 10 -5) (таблица 1).

Таблица 1 .

Схема посевов на питательные среды

По 1 мл каждого разведения внесла в одну чашку Петри, с заранее маркированной крышкой, и залила 14±1 мл расплавленным и охлажденным до температуры 40-45°С агаром. Сразу после заливки агара содержимое чашки Петри тщательно перемешала путем легкого вращательного покачивания для равномерного распределения посевного материала. После застывания агара чашки Петри перевернула крышками вниз и поместила в термостат при 30±1°С на 72 часа.

Количество выросших колоний подсчитала в каждой чашке, умножила на степень (формула 1).

Формула расчета: Х= n*10 m

где n - количество колоний, подсчитанных на чашке Петри;

m - число десятикратных разведений.

Получила следующее среднее значение (таблица 2).

Таблица 2.

Количество выросших колоний

Из таблицы 2 видно, что в чашке Петри с разведением 10‾ 3 выросло 21 колония, что соответствует 21000 микроорганизмов; в чашке с разведением 10‾ 4 – 13 колоний (130000), а в чашке с разведением 10‾ 5 – 6 колонии (600000). Среднее значение трех показателей составило 250333 (250,333 тыс.) микроорганизмов.

Таким образом, общее микробное число в молоке, а именно количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в исследуемом молоке составляет 250,333 тыс. По санитарным правилам и нормам (СанПин 2.3.2.1078-01) данное сырое молоко можно отнести к категории «высший сорт», поскольку КМАФАнМ составило менее 300 тыс. бактерий в 1 мл.

Также необходимо отметить, что данное сырое молоко соответствует ГОСТ Р 53430-2009, пригодно для непосредственного потребления, переработки на молочные продукты, отвечает требованиям санитарного состояния содержания животных и гигиены получения молока.

Список литературы :

1. Госманов Р.Г. Санитарная микробиология: Учебное пособие. – СПб.: Издательство «Лань», 2010. – 240с.
2. Ильясова З. З. Методические указания к практическим занятиям С2.Б.11 Ветеринарная микробиология и микология: Методические указания / З. З. Ильясова. – Уфа: Башкирский ГАУ, 2015. – 28 с.
3. Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа: ГОСТ Р 53430-2009. – Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 ноября 2009 г. № 520-ст. – М. : Стандартинформ, 2010.