Определяне на общото микробно число на речна вода. Санитарен и микробиологичен контрол на водите на откритите водоеми, качеството на питейната вода. Вземане на проби и подготовката им за анализ

Съдържание на темата "Санитарни и бактериологични изследвания.": Под контролвключва изследване и заключение за възможността за използване на резервоар (за пиене, битови или други нужди), изясняване на причините за фекално замърсяване и определяне на способността на резервоара да се самопречиства. Определя се ТМС, изолират се колиформни бактерии, Escherichia coli, ентерококи, стафилококи и патогенни микроорганизми (salmonella, vibrio cholerae, leptospira, shigella и ентеровируси).

Броят на последните не трябва да надвишава 100 на 1 литър в зоната за плуване и не повече от 20 на 1 литър вода в басейните и морска вода. IN последните годиниРазработени и предложени са допълнителни критерии за оценка на санитарното състояние на водните обекти, които включват показатели за титъра на ентерококите и Clostridium petfringens, както и бактериофагния индекс.

Санитарен и микробиологичен контрол на качеството на питейната вода

Санитарно микробиологично изследване питейна вода включва определяне на TMC, броя на ентеробактериите, спори на сулфит-редуциращи клостридии и колифаги.

Дефиниция на TMCпри оценка на качеството на питейната вода. WMS позволява да се оцени нивото на микробно замърсяване на питейната вода, допълвайки индикаторите за фекално замърсяване и в същото време позволява идентифициране на замърсяване от други източници (например промишлени изхвърляния). Неочаквано увеличение на TMC (дори в рамките на стандарта), открито отново, служи като сигнал за търсене на причината за замърсяване. Този индикатор е незаменим и за спешно откриване на масивно микробно замърсяване с неизвестна природа в питейната вода. Всяка анализирана проба трябва да бъде инокулирана в най-малко две петровки с обем 1 ml. След 24 часа се преброяват порасналите колонии и на двете блюда, резултатите се сумират и се разделят на две. Крайният резултат се изразява чрез броя на образуващите колонии единици (CFU) в 1 ml от тестовата водна проба. В 1 ml питейна вода не трябва да има повече от 50 CFU.

Определяне на броя на ентеробактериите. Когато провеждат изследвания, те не се ограничават до откриването на колиформни бактерии, а използват по-широко понятие - бактерии от семейство Enterobacteriaceae и термотолерантни колиформни бактерии.

Бактерии от семейство Enterobacteriaceaeвключват грам-отрицателни, оксидазо-отрицателни, спорообразуващи пръчки, които растат върху среда с лактоза (например Endo) и ферментират глюкоза до киселина и газ при температура от 37 ° C за 24 часа в питейната вода показва потенциална епидемична опасност от използването на вода. Индикаторът „бактерии от семейство Enterobacteriaceae* е основният стандартизиран показател, който осигурява най-надежден контрол на наличието на почти всички представители на чревните бактерии във водата.

Термотолерантни колиформни бактерииимат всички характеристики на бактериите от семейство Enterobacteriaceae и в допълнение ферментират лактозата с образуване на алдехид, киселина и газ при температура от 44 ° C за 24 часа. Термичната толерантност бързо се губи, поради което откриването на бактерии с това свойство показва скорошно навлизане на чревни бактерии във водата (прясно фекално замърсяване).

Числен израз на резултата от анализа характеризира степента на фекално замърсяване на водата. В 300 ml питейна вода трябва да отсъстват бактерии от семейство Enterobacteriacea и термотолерантни бактерии.

Откриване на сулфит-редуциращи спори на клостридии. Спорите на сулфит-редуциращите клостридии са по-устойчиви на дезинфекция и неблагоприятни фактори на околната среда, отколкото други индикаторни бактерии. Въз основа на това свойство индикаторът се препоръчва за оценка на ефективността технологични процесипречистване на водата. Този показател е от особено значение при оценката на първичното хлориране, тъй като инактивира почти всички индикаторни бактерии. Откриването на клостридии във вода преди постъпване в разпределителната мрежа показва недостатъчно третиране и че патогените, устойчиви на дезинфекция, вероятно не са били унищожени по време на третирането. В 20 ml от тестваната питейна вода трябва да липсват спори на сулфитредуциращи клостридии.

Определяне на броя на колифагите. Най-често съдържанието на колифаги в питейната вода се определя чрез метода на титруване, който включва предварителното им отглеждане в обогатителна среда (култура на Escherichia coli върху хранителен агар), последвано от откриване на колифаги на тревата от E. coli да няма PFU на колифаги в 100 ml от тестваната вода.

Несъответствието на водата, както и химичното, я прави неподходяща за пиене. Ако вашият водоизточник не е защитен от преки влияния на околната среда или инженерните системи са остарели или не са били почиствани дълго време, тогава микробиологичното изследване е просто необходимо. Вашето здраве и безопасност зависят от това! Това е особено важно за тези, които използват кладенец. – почва, тя е в пряк контакт с почвата, което означава, че заплашва да ви „изпие“ с нитрати, тежки метали, амоняк и, разбира се, вредни органични вещества, които попадат в почвата в резултат на дейността на земеделските стопанства или земи.

Таблица 1 представя микробиологичните показатели на действащия стандарт SanPiN 2.1.4.1074-01 за питейна вода:

Таблица 1. Микробиологични стандарти за питейна вода

Стандартен микробиологичен анализ

Стандартният микробиологичен анализ на питейната вода в Московския държавен университет включва определянето на три показателя: общо микробно число, общо колиформни и термотолерантни колиформни бактерии.

Разширен микробиологичен анализ

Разширеният микробиологичен анализ на водата включва анализ на пет показателя: общ микробен брой, общ брой колиформни бактерии, брой термотолерантни колиформени бактерии, титър на колифаги и съдържание на спори на сулфит-редуциращи бактерии.

Микробиологичен анализ на повърхностни водни тела (езера, реки, басейни)

В нашия имот или наблизо често има водни басейни, където ние и нашите деца обичаме да прекарваме времето си. Разбира се, водата в тези резервоари не е питейна, но нейната безопасност за хората, както и питейната вода, е регулирана. В таблица 2 са представени микробиологичните показатели на действащия стандарт за хигиенни изисквания за защита повърхностни води(SanPiN 2.1.5.980-00)

Таблица 2. Микробиологични норми за рекреационно водоползване, както и в населените места

Стандартен микробиологичен анализ (повърхностни водни тела)

Микробиологичният анализ на вода, непредназначена за пиене, включва определяне на количеството по два показателя: общи колиформни и колиформни термотолерантни бактерии.

Разширен микробиологичен анализ (повърхностни водни тела):

Освен двата основни показателя предлагаме да се направи допълнителен анализ за съдържанието на: колифаги, опортюнистични дрожди и микромицети (чести спътници на опортюнистични заболявания) и индекса на самопречистване на водоема.

Определяне на бактерии от род Salmonella и род Enterococcus

Ако стандартите на SanPiN 2.1.5.980-00 са значително превишени, както и възможно фекално замърсяване на резервоара, предлагаме да се извърши анализ за наличие на патогени чревни инфекции(род Salmonella и Enterococcus).

Речник

Общо микробно изобилие (TMC)

Методът определя в питейна вода общ броймезофилни аеробни и факултативно анаеробни микроорганизми (FAM), способни да образуват колонии върху хранителен агар при температура 37 ° C за 24 часа, видими с 2-кратно увеличение. Този индикатор идентифицира потенциални бактерии, които могат да причинят вреда на човешкото здраве.

Обикновени колиформени бактерии (TCB)

Обикновените колиформени бактерии (TCB) са грам-отрицателни, оксидаза-отрицателни, необразуващи спори пръчици, способни да растат върху диференциална лактозна среда, ферментирайки лактозата до киселина, алдехид и газ при температура (37+1) °C за ( 24-48) часа. Много представители на тази група са микроорганизми от нормалната микрофлора на стомаха, така че излишъкът от тази група микроорганизми може да показва възможно антропогенно (включително фекално) замърсяване на водата.

Термотолерантни колиформени бактерии (TCB)

Термотолерантните колиформни бактерии (TCB) са сред обикновените колиформни бактерии, притежават всички техни характеристики и освен това са способни да ферментират лактоза до киселина, алдехид и газ при температура (44 ± 0,5) ° C за 24 часа. Също като OKB, те са индикаторна група, но са по-стабилни в среда: Ето защо откриването на тази група микроорганизми във водата може да показва нейното недвусмислено замърсяване с човешки отпадъци.

Колифаги

Колифагите, определени по стандартния метод (MUK 4.2.1018-01), са вируси на E. coli (Escherichia coli) и се считат от епидемиолозите като допълнителен, а понякога и по-чувствителен метод за определяне на замърсяването на водата с микроорганизми E. coli. Вирусните частици и по-специално колифагите са по-устойчиви на околната среда от техните бактериални гостоприемници. В тази връзка наличието на колифаги може да служи като надежден индикатор за по-старо фекално замърсяване на водоизточник. Показана е пряка връзка между съдържанието на колифаги във вода и опасни за хората ентеровируси, следователно наличието на колифаги във вода може да означава вирусно замърсяване на източника. Настоящият нормативен документ (SanPiN 2.1.4.1074-01) предполага липсата на колифаги в 100 ml вода.

Сулфит-редуциращи спори на клостридии

Сулфит-редуциращите клостридии са спорообразуващи анаеробни пръчковидни микроорганизми, които са допълнителен микробиологичен индикатор за фекално замърсяване на резервоар. За разлика от сравнително нестабилните колиформни и термотолерантни колиформни бактерии, спорите на клостридиите могат да се задържат във водни тела за дълго време. Клостридиите се намират в червата на хората и домашните животни, но ако бъдат погълнати в големи количества с вода, те могат да причинят хранително отравяне. Сулфит-редуциращите клостридии включват и опасни за хората клостридии (Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani), които причиняват тежки заболявания. Съгласно действащия стандарт (SanPiN 2.1.4.1074-01), спорите на клостридиите трябва да отсъстват в 20 ml вода.

Опортюнистични дрожди и микромицети

Опортюнистични дрожди и микромицети (плесени) включват голяма хетерогенна група от гъбични организми, които могат да растат сапротрофно при 37 °C. Включва представители като Candida albicans и Cryptococcus neoformans, които са често срещан фактор при опортюнистични заболявания при човека, причиняващи кандидоза (гъбични кожни заболявания), млечница и др. Други микромицетни организми (Cladosporium cladosporioides, Aspergillusniger) могат да бъдат активни сенсибилизатори на алергични реакции, а понякога дори и самите алергени. В Руската федерация водата не се регулира за мухъл и дрожди във водата.

Определяне на индекса на самопочистване (от МУК 4.2.1884-04)

Общият брой на микроорганизмите не е стандартизиран във водата на резервоарите в зоните за отдих, тъй като нивото на тази група микроорганизми до голяма степен зависи от природните характеристики на всеки обект, времето на годината и др.

Въпреки това, при избора на нов източник на водоснабдяване или място за отдих във водата на резервоарите, е необходимо допълнително да се определи общият микробен брой, който се увеличава:

• при температура 37 °C за 24 часа;
• при температура 22 °C за 72 часа.

Предполага се, че:

1. ТМС при 37 °C е представена предимно от алохтонна микрофлора (внесена в резервоара в резултат на антропогенно замърсяване, включително фекално);
2. ТМК при 20-22 °C освен алохтонна е представена и от местна микрофлора (естествена, характерна за даден водоем).

Съотношението на броя на тези групи микроорганизми позволява да се прецени интензивността на процеса на самопречистване. В края на процеса на самопочистване коефициентът на TMC е 22 °C / TMC е 37 °C. В местата на замърсяване с битови отпадъци отпадъчни водичислените стойности на двете групи са близки.

Индикаторът ви позволява да получите допълнителна информацияза санитарното състояние на водните тела, източниците на замърсяване, процесите на самопречистване.

Водата от чешмата се инокулира в обем 1 cm3 (1 ml). Пробата се добавя към стерилно петриево блюдо, излива се в 10-12 ml разтопен и охладен до 45°C хранителен агар и се смесва с вода. Инокулацията се инкубира при 37°C за 1-2 дни. След това се преброява и изчислява броят на колониите, израснали на повърхността и в дълбочината на средата микробен брой на водата- брой микроорганизми в 1 ml.

Метод на титруване
За да изследвате чешмяна вода, инокулирайте три обема от 100 ml, три обема от 10 ml и три обема от 1 ml в глюкозо-пептонна среда. Културите се инкубират в продължение на 24 часа при 37°C. За ферментацията се съди по наличието на газови мехурчета в поплавъка. Ферментирали или мътни проби се инокулират върху среда Endo.
От порасналите колонии се правят натривки, оцветяват се по Грам и се прави оксидазен тест, който дава възможност да се разграничат бактериите от родовете Escherichia, Citrobacterи Enterobacterот грам-отрицателни бактерии от семейството Pseudomonadaceaeи други оксидаза-положителни бактерии, живеещи във вода.
Coli титър водата се измерва с минималното количество вода (ml), в което се откриват колиформни бактерии, коли-индекс - количеството колиформи, съдържащо се в 1 литър вода за изпитване.

Определяне на микробно число във въздуха

Количествените микробиологични методи за изследване на въздуха се основават на принципите на отлагане (утаяване), аспирация или филтрация.
Седиментационен метод.Две петриеви панички с хранителен агар се оставят отворени за 60 минути, след което посевите се инкубират в термостат при 37°C. Резултатите се оценяват по общия брой на колониите, пораснали върху двете блюда: ако има по-малко от 250 колонии, въздухът се счита за чист; 250-500 колонии - умерено замърсени, с повече от 500 колонии - замърсени.
Метод на аспирация- по-точен количествен метод за определяне на микробния брой на въздуха. Въздушната сеитба се извършва с помощта на инструменти (устройство на Кротов и пробоотборник PAB-1).
Апаратът на Кротов е проектиран по такъв начин, че въздухът изтича с определена скорост през тесен процеп на плоча от плексиглас, покриващ петриево блюдо с хранителен агар. В този случай аерозолните частици със съдържащите се върху тях микроорганизми са равномерно фиксирани върху цялата повърхност на средата поради постоянното въртене на чашата под входния процеп.
След инкубиране на реколтата в термостат се изчислява микробното число

Методи за стерилизация

• Топлинна: ​​пара и въздух (суха топлина)
• Химически: газ или химически разтвори (стериланти)
• Плазма (плазма с водороден прекис)
• Радиационна стерилизация - използва се в индустриален вариант
• Метод на мембранен филтър - използва се за получаване на малки количества стерилни разтвори, чието качество може рязко да се влоши под въздействието на други методи за стерилизация (бактериофаг, селективна хранителна среда, антибиотици)

Методи за термична стерилизация

Предимства на методите за термична стерилизация:

• Надеждност
• Няма нужда да премахвате стерилизатори от медицински консумативи
• Удобство на персонала
• Стерилизацията се извършва в опаковки, което ви позволява да поддържате стерилност за определен период от време.

Парна стерилизация

Осъществява се чрез подаване на наситена водна пара под налягане в парни стерилизатори (автоклави).

Най-много се счита за стерилизация под налягане с пара ефективен метод, тъй като колкото по-високо е налягането, толкова по-висока е температурата на парата, стерилизираща материала; Бактерицидните свойства на парата са по-високи от тези на въздуха, така че за стерилизация се използва пренаситена пара.

Изделия от текстил (бельо, памучна вата, превръзки, конци), гума, стъкло, някои полимерни материали, хранителни среди и лекарства се подлагат на парна стерилизация.

Свързана информация:

1. Анализ на връзката между технологичните променливи, определяне на основните изисквания за управление на процесите, формулиране на критерии за качество и цели на управление
2. Анализ на динамиката на броя на пожарите за 2010-2014 г. и прогноза за броя на пожарите за 2015г
3. Анализ на броя на пожарите в района, обслужван от 3 РОНД за периода 2010-2014 г.
4. Ангина: 1) определение, етиология и патогенеза 2) класификация 3) патологична анатомия и диференциална диагноза на различни форми 4) локални усложнения 5) общи усложнения

STYLAB предлага тестови кърпички, тестови субстрати и микробиологични печати за определяне на TMC и QMAFAnM в различни проби.

Общото микробно число (ТМК) е показател за оценка на общото бактериално натоварване. Това е един от основните показатели, определяни при санитарно-микробиологични изследвания. Това е общото количество от всички, съдържащи се в 1 ml или 1 cm 3 проба. Стойността му се изразява в единици, образуващи колонии: CFU/ml или CFU/cm3. Единица, образуваща колония, е микроорганизъм, който образува колония по време на репродукцията.

Смята се, че колкото по-висок е TMC, толкова по-вероятно е наличието на патогени в обекта, който се изследва. Всъщност стойността на този показател се влияе и от сапротрофи, които предотвратяват развитието на патогенни микроорганизми, а TMC ясно корелира само със степента на замърсяване на обекта с органични вещества. Това обаче е важен санитарен показател, тъй като ви позволява да оцените чистотата и качеството на дезинфекцията на вода, повърхности, оборудване и други обекти на околната среда.

Мезофилните аеробни и факултативно анаеробни организми (CAFAnM) обикновено се измерват в хранителни продукти. Аеробните микроорганизми са живи същества, които се нуждаят от кислород, за да съществуват. Факултативните аероби могат да живеят и да се възпроизвеждат както в присъствието на кислород, така и без него. Понякога терминът QMAFAnM се използва като синоним на OMC. Стойността му се изразява в CFU/g или CFU/cm3. KMAFAnM ви позволява да оцените условията за съхранение и транспортиране хранителни продукти. GMC и QMAFAnM не са приложими за оценка на продукти, които имат собствена микрофлора, например продукти с млечна киселина, бира, квас и др.

За да се определят TMC и QMAFAnM, проба от първоначалната концентрация и няколко от нейните последователни десетократни разреждания в стерилна вода или разтвор се инокулират върху средата. Това е необходимо в случай, че в оригиналната проба има много микроорганизми и ще бъде невъзможно да се разграничат колониите, образувани от тях. За да определите QMAFanM, препоръчваме да използвате тестови кърпички. TMC може да се определи и върху твърди повърхности чрез отпечатване с помощта на микробиологични печати.

Чрез определяне на TMC може да се оцени и ефективността на дезинфектантите. За да направите това, е необходимо да използвате среда с вещества, които неутрализират ефекта им, тъй като при намаляване на ефективността им дезинфектантите не унищожават микроорганизмите, а само инхибират растежа им. В обикновена среда такива организми нямат време да образуват колонии. Микробиологичните печати са предназначени за такава оценка.

IN руска федерацияи страните от Митническия съюз, параметрите на GMC и QMAFAnM не трябва да надвишават установените от CU TR „За безопасността на хранителните продукти“ и други технически регламенти на Митническия съюз. Актуална законодателна информация можете да намерите на уебсайта

Сурово мляко е мляко, което не е подложено на термична обработка при температура над 40ºС или на обработка, в резултат на която са променени съставните му части.

Суровото мляко може да съдържа опасни микроорганизми, които могат да причинят инфекциозни заболяванияи хранително отравяне. Суровото мляко е на първо място сред храните, чиято консумация е свързана с риск от сериозни заболявания.

Видът на млякото зависи от количеството MAFAnM в 1 ml мляко съгласно санитарните правила и норми (SanPiN 2.3.2.1078-01), суровото мляко се разделя на:

• за сурово мляко, премиум клас - не повече от 300 хиляди бактерии на 1 ml;
• за сурово мляко, клас I - не повече от 500 хиляди бактерии на 1 ml;
• за сурово мляко, клас II - не повече от 4 милиона бактерии на 1 ml.

Цел на изследването: да се изследва нивото на микроорганизми в суровото мляко. В тази връзка беше поставена задача: да се определи нивото на общия микробен брой в млякото, а именно KMAFAnM (броят на мезофилните аеробни и факултативно анаеробните микроорганизми).

Материалът за изследването е сурово мляко, взето от крава на име „Снежинка“, порода Симентал, намираща се в болницата на Башкортостанския държавен аграрен университет.

рисуване1 . Проба от изследваното мляко.

Определянето на QMAFAnM е извършено в съответствие с действащия GOST R 53430-2009. Методът се основава на способността на мезофилни аеробни и факултативно анаеробни микроорганизми да се размножават върху хранителна среда (МРА) при температура 30±1°C в продължение на 72 часа.

Приготвях последователни десетократни разреждания от сурово мляко, т.е. 1 ml сурово мляко се добавя към епруветка с 9 ml стерилна вода, за да се получи първото разреждане от 1:10 (10‾¹). От първото разреждане 1 ml се прехвърля във втора епруветка с 9 ml стерилна вода - второто разреждане беше 1:100 (10‾²) и така нататък до разреждане 10 -5.

Изолирането на QMAFAnM от проби от сурово мляко се извършва чрез инокулиране на последните три разреждания (10 -3, 10 -4, 10 -5) (Таблица 1).

Таблица1 .

Схема на отглеждане на хранителни среди

1 ml от всяко разреждане се добавя към едно петриево блюдо с предварително етикетиран капак и върху него се изсипват 14 ± 1 ml разтопен агар, охладен до температура 40-45°C. Веднага след изливането на агара, съдържанието на петриевата паничка се разбърква старателно чрез леко ротационно разклащане, за да се осигури равномерно разпределение на инокулума. След като агарът се втвърди, петриевите панички се обръщат с главата надолу и се поставят в термостат при 30±1°C за 72 часа.

Броят на порасналите колонии се преброява във всяка чаша и се умножава по мощността (формула 1).

Формула за изчисление: X= n*10 m

където n е броят на колониите, преброени в петриево блюдо;

m е броят на десетократните разреждания.

Получих следната средна стойност (Таблица 2).

Таблица 2.

Брой отгледани колонии

От таблица 2 може да се види, че в петриево блюдо с разреждане 10‾3 са се развили 21 колонии, което съответства на 21 000 микроорганизми; в блюдо с разреждане 10‾ 4 – 13 колонии (130 000), а в блюдо с разреждане 10‾ 5 – 6 колонии (600 000). Средната стойност на трите показателя е 250333 (250,333 хил.) микроорганизма.

По този начин общият брой на микробите в млякото, а именно броят на мезофилните аеробни и факултативно анаеробните микроорганизми в изследваното мляко е 250,333 хил. Според санитарните правила и норми (SanPin 2.3.2.1078-01), това сурово мляко може да се класифицира като. „най-висок клас“, тъй като QMAFAnM е по-малко от 300 хиляди бактерии в 1 ml.

Трябва също така да се отбележи, че това сурово мляко отговаря на GOST R 53430-2009, подходящо е за директна консумация, преработка в млечни продукти, отговаря на санитарните изисквания за отглеждане на животни и хигиената на производството на мляко.

Референции:

1. Госманов Р.Г. Санитарна микробиология: Урок. – Санкт Петербург: Издателство “Лан”, 2010. – 240 с.
2. Илясова З.З. Насокиза практически занятия S2.B.11 Ветеринарна микробиология и микология: Методически указания / З. З. Илясова. – Уфа: Башкирски държавен аграрен университет, 2015. – 28 с.
3. Мляко и млекопреработвателни продукти. Методи за микробиологичен анализ: GOST R 53430-2009. – Одобрен и въведен в сила със заповед на Федералната агенция за техническо регулиране и метрология от 27 ноември 2009 г. № 520-st. – М.: Стандартинформ, 2010.